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不列颠哥伦比亚大学采用八位RED96e系统快速确定相互作用动力学

在Peptidisc肽的生物素化版本

英属哥伦比亚大学

詹姆斯·萨维尔,露​​西Troman,弗兰克平阳万和

8通道字节系统:八位RED96e

挑战

膜蛋白(MP)构成只有30%我们的蛋白质,但包括当前的治疗靶60%以上。膜蛋白的比例过高这一作为药物靶点是因为它们很容易在细胞的外部访问和营养成分,细胞沟通的摄取中起关键作用,一般使细胞与环境进行交互。尽管有明显的基本和医疗相关性,膜蛋白严重不足在结构和相互作用数据库很大程度上归因于膜蛋白的水溶液中的固有的不溶性,一个先决条件,几乎所有的生化分析。这种溶解性问题是一个主要障碍MP表征和剥削的治疗靶点。

解决方案

在平阳实验室的成员,在不列颠哥伦比亚大学最近开发出一种膜模拟,叫peptidisc,即复制天然膜环境,同时保持膜蛋白溶解于溶液中。在形成peptidisc当到目标膜蛋白的疏水性表面的两亲性肽结合的多个副本。稳定复原成peptidisc时发生洗涤剂除去,既脂质和膜蛋白包埋成水溶性的颗粒。所述peptidisc制剂通过将靶膜蛋白本身的尺寸和拓扑引导,并且因此发生在自发的方式,只需要很少的优化。

为了分析peptidisc稳定的膜蛋白的蛋白 - 配体相互作用,使用关于八位RED96e可用已建立的基于链霉亲和结合测定,该实验室引入的peptidisc肽的生物素化的版本。生物素官能团允许peptidisc颗粒附着到通过盘链霉亲和涂层的提示。这些配体结合的尖端在含结合配偶体(分析物)中的溶液中温育,然后进入其中测量所述分析物和配体的解离缓冲液。此automized测量被留下来在一天结束时在八比特组运行,并且在第二天早上所得到的数据在10分钟内进行分析。

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乐动体育买球福特生物公司的8信道八位位组系统在1.5小时内进行32分钟96个样品的定量和64个样本动力学筛选。分析可使用单个信道或多达8个通道来进行,可以通过根据需要使在样品的灵活性。一个可选的微孔板蒸发盖,在样品体积的损失最小化可与八位RED96e。

结果

使用生物素化的peptidisc肽和八位RED96e系统中,平阳实验室确定的细菌膜受体(的FhuA)和抗微生物肽大肠杆菌素M的设计工作流程包括八位RED96e允许他们从生长的细胞去的结合动力学,来测定在24小时内的相互作用。

由八位产生相互作用动力学的实时读数允许在不列颠哥伦比亚大学的实验室平阳立即看到,如果他们的测定,建立正确的,如果他们被检测它们之间的相互作用。

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